免疫組織化學實驗中細胞的脫水

【資料簡介】

1、細胞脫水概述
組織經(jīng)固定和水洗后，會有大量的水分留在組織中，而水又不能與苯融合，因此必須在透明前脫去組織中的水分。用某些溶劑將組織中的水分置換出來的過程稱為脫水。對于不同的組織應分開脫水，特別是一些易脆的組織（如肝、脾等）應嚴格掌握脫水時間，防止在*中停留時間過長。對于動物組織，應比人體標本相應縮短脫水時間。脫水應按照從低濃度到高濃度的過程，否則標本直接進入高濃度溶液中極易引起組織的強烈收縮或使組織發(fā)生變形，從而影響切片，還會造成免疫組化實驗過程中的脫片。
2、脫水劑的種類
（1）、乙醇：zui常用的脫水劑，脫水能力強，并能使組織硬化，與二甲苯能混合。其缺點是在高濃度乙醇，特別是無水乙醇中停留時間長會引起組織收縮、變脆而影響后續(xù)的切片。尤其是應用全自動脫水機，因是加壓抽真空并加溫脫水，在高濃度乙醇中停留時間更不能太長，應經(jīng)試驗摸索出適合自己單位脫水需要的時間，不能盲目從書本上套用脫水時間。脫水時，應從低濃度向高濃度梯度進行。一般是人體組織從?5％乙醇開始，對于小動物、胚胎及柔軟的組織可從30％乙醇開始脫水。只有脫水充分，才能在透明劑中透明。若是人工脫水，必須在加蓋的容器內(nèi)進行，尤其是高濃度乙醇很易吸收空氣中的水分，陰雨天更應注意。在透明前將組織取出，用濾紙吸干后再透明。
（2）、丙酮：脫水作用比乙醇強，但對組織的收縮也大，毒性強，價格高，因此一般不用于常規(guī)組織的脫水，主要用于快速脫水及固定兼脫水。此時應注意個人防護，在帶有抽風功能的裝置中進行，脫水時間1～3h左右。丙酮還可作為染色后的脫水劑，用于甲基綠—派洛寧顯示DNA及RNA。
（3）、正丁醇：為五色液體，微溶于水，在100ml水中只能溶解8．3g，故脫水能力較弱，但能與水、乙醇及石蠟混合，因此經(jīng)正丁醇脫水的組織可直接浸蠟。它的優(yōu)點是很少引起組織的收縮及變脆。一般用法為：組織經(jīng)固定及沖洗后，依次人50％、70％、80％乙醇中脫水，然后人正丁醇，12～24h后浸蠟。使用時也應注意防護。http://m.bulouwang.com/Login/default?Stand_DownLoadOperate
（4）、叔丁醇：異丁醇的一種，可與水、乙醇、二甲苯混合，可以單用或與乙醇混合使用，是一種使用較廣的脫水劑，它不會使組織收縮或變硬，不必經(jīng)過透明而直接浸蠟。電鏡上為常用的中間脫水劑。
（5）、環(huán)己酮：沸點為140~C，冰點為一40~C，密度與水相似，無毒，可與苯、二甲苯、氯仿等有機溶劑混合，也是石蠟溶劑，可代替純乙醇脫水后直接浸蠟，組織不會變硬，不需經(jīng)二甲苯透明。
（6）、松脂醇：組織固定后按常規(guī)經(jīng)各濃度乙醇至95％乙醇中，按下列順序進行脫水和透明處理：
①、浸入等份95％乙醇和松脂醇的混合液中，待組織塊下沉后轉(zhuǎn)入下步處理；
②、95％乙醇1份加松脂醇2份的混合液中浸泡1h；
③、95％乙醇1份加松脂醇3份的混合液中浸泡1h；http://m.bulouwang.com/Login/default?Stand_DownLoadOperate
④、松脂醇I、Ⅱ、Ⅲ中各浸泡1h；⑤松脂醇5份加石蠟1份的混合液中浸泡lh，然后浸蠟包埋。多用于經(jīng)乙醇或Carnoy液固定的組織。經(jīng)松脂醇處理的組織收縮較小，發(fā)生硬化也少。